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大型質粒抽提試劑盒的操作方法
發(fā)布日期：
2017-11-23
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大型質粒抽提試劑盒采用堿裂解法裂解細菌，再通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司*新型材料。、專一吸附DNA。大型質粒抽提試劑盒使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、連接、轉化、文庫篩選、體外翻譯、轉染一些常規(guī)的傳代細胞等。
1) 柱平衡步驟：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液BL，12,000rpm(～13400×g)離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
2) 將4.5ml過夜培養(yǎng)的菌液，加入離心管中，使用常規(guī)臺式離心機，12,000rpm(～13400×g)離心1min，盡量吸取上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。
3) 向留有菌液的離心管中加入250μl溶液P1（請先檢查是否已加入RNaseA），使用移液器或渦旋振蕩器*懸浮細菌沉淀。注意：如果有未*混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。
4) 向離心管中加入250μl溶液P2，溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。注意：溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質粒中混有基因組DNA片段。此時菌液應變得清亮粘稠，所用時間不應超過5min，以免質粒受到破壞，如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不*，應減少菌體量。
5) 向離心管加入350μl溶液P3（，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻，此時將出現(xiàn)白色絮狀沉淀12000rpm(～13400×g)離心10min，此時在離心管底部形成沉淀。注意：P3加入后應立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
6）將上一步收集的上清液用移液器轉移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意盡量不要吸出沉淀，12000rpm(～13400×g)離心30-60s。倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP3放入收集管中。
7）可選步驟：向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm(～13400×g)離心30-60s，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP3重新放回收集管中。
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